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分子雜交儀原理
分子雜交儀又稱分子雜交爐和分子雜交盒,是一種通過核酸分子雜交檢測(cè)基因組中是否存在已知基因序列的裝置。它廣泛應(yīng)用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的檢測(cè)和遺傳疾病的基因診斷。
根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的需要,分子雜交儀可選用不同規(guī)格型號(hào)。攪拌技術(shù)是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室的理想設(shè)備,它可以代替塑料攪拌袋和水浴搖瓶,避免攪拌袋損壞帶來的污染風(fēng)險(xiǎn)。混合爐具有微機(jī)精確控溫、爐內(nèi)空氣循環(huán)裝置設(shè)計(jì)獨(dú)特、升溫速度快等特點(diǎn)。
它廣泛應(yīng)用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性和定量檢測(cè)以及疾病的診斷。因此,它不僅在分子生物學(xué)領(lǐng)域,而且在臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。
分子雜交儀由盒體、混合瓶或離心管、混合管、振動(dòng)篩、隔膜、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)等組成,如圖所示,不同類型盒體所含的試管、微孔板、滑板、平板的數(shù)量也不同。
分子雜交儀的原理如下
根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理,在一定條件下,利用標(biāo)記的已知DNA或RNA片段(探針)對(duì)樣品中待測(cè)DNA序列進(jìn)行檢測(cè)。
在生理?xiàng)l件下,DNA是一種穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。在體外,當(dāng)有變性因素(如溫度超過65℃)℃, 胺或極端pH),DNA分子中的氫鍵斷裂并解離成兩個(gè)單鏈DNA。這種現(xiàn)象稱為變性。去除變性因子后,單鏈DNA可以重組形成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)。這個(gè)過程稱為復(fù)性或退火。
在復(fù)性過程中,如果存在與部分樣本核酸序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17-45堿基),則二者可以通過互補(bǔ)堿基形成雜交,即雙鏈DNA分子。這個(gè)過程叫做雜交。當(dāng)一個(gè)已知的DNA片段加入到重新折疊的DNA中,如果它能結(jié)合成一個(gè)雙鏈分子,就意味著樣品中含有一個(gè)已知的DNA序列。